Нормальные показатели ПЦР-теста в крови: что нужно знать

ПЦР-тест (полимеразная цепная реакция) является важным методом для диагностики инфекционных заболеваний, так как позволяет обнаруживать РНК или ДНК возбудителей. Нормальные показатели ПЦР-теста в крови могут варьироваться в зависимости от конкретного заболевания и состояния пациента, однако они обычно интерпретируются как отсутствие или минимальное количество целевых генетических последовательностей.

Важно помнить, что результаты теста должны расцениваться в контексте клинической картины и других лабораторных данных. При наличии сомнений или положительных результатах необходимо обратиться к врачу для дальнейшего обследования и назначения лечения.

Анализ ПЦР на гепатит C

Для того чтобы установить диагноз гепатита, необходимо провести ряд анализов, позволяющих выявить вирус в крови. Одним из методов диагностики является полимеразная цепная реакция (ПЦР) для определения гепатита С. Каковы основные принципы этого метода, почему его важно использовать, каким образом выполняется тест и как интерпретируются результаты?

Полимеразная цепная реакция применяется не только для выявления гепатита, но и для диагностики различных заболеваний, таких как язва желудка, колит и энтерит. Однако ее ключевое преимущество заключается в способности обнаруживать как сам вирус гепатита C, так и антитела к нему, которые могут избегать реакции иммунной системы из-за своей изменчивости.

Принцип работы исследования состоит в создании условий, позволяющих запустить цепную реакцию РНК вируса гепатита. Если в результате сопоставления с нуклеотидной последовательностью вируса гепатита C обнаруживаются совпадения, это указывает на наличие вирусных частиц в крови и процессы их распада в печени. Если вирусная нагрузка ниже установленного порога, диагноз будет отрицательным; в противном случае – положительным.

Важно понимать, что в первом случае не исключается недавнее инфицирование или мощная противовирусная терапия, являющиеся факторами, снижающими концентрацию опасных частиц, и анализ ПЦР на гепатит не работает. Высокий же уровень содержания вируса в организме в большинстве случаев сигналит о том, что в печени вот-вот начнется инфекционный процесс. Не исключено, что заболевание находится в запущенном состоянии и понадобится серьезная терапия, вплоть до пересадки органа.

Существует два типа ПЦР-тестов на гепатит: качественный и количественный.

Основной враг печени

К количественному анализу, о котором уже говорилось, относят определение уровня РНК вируса гепатита в организме. Данный тест предоставляет информацию о скорости прогрессирования болезни и эффективности терапии. Количественный анализ на гепатит C крайне важен, так как он позволяет выявить устойчивость к противовирусным препаратам и внести корректировки в лечение.

После завершения курса лечения PCR предоставляет информацию о дальнейших тактиках наблюдения. В некоторых случаях может потребоваться дополнительная диагностика. Например, если наблюдается повышение уровня АЛП (но не более чем в два раза в течение полугода), а результаты анализа показывают вирусную нагрузку выше 105 МЕ/мл, может потребоваться биопсия. Если количественный анализ выявляет выраженное воспаление и фиброз, назначается курс противовирусных препаратов.

В ситуациях, когда наблюдается высокая вирусная нагрузка в сочетании с повышенным уровнем АЛТ, больному немедленно назначается лечение без дополнительных исследований.

Качественно расшифровать показатели при количественном анализе крови на гепатит могут только квалифицированные и опытные специалисты, а современные технологии помогают сделать это при низкой концентрации вируса в крови.

Качественный анализ ПЦР выполняется для подтверждения существования вируса в организме. Он проводится при наличии в крови антител к гепатиту. Такой анализ гарантирует 100% точность и позволяет диагностировать заболевание на ранних стадиях, что способствует началу борьбы с инфекцией в течение первых недель после заражения, повышая шансы на выздоровление, особенно в случае гепатита B.

Заболевания соседних органов

Преимущества ПЦР

С помощью ПЦР можно Выяснить генотип вируса. Существует шесть генотипов и множество субтипов вируса, но в нашей области наиболее распространены генотипы 1, 2 и 3.

Другими преимуществами данного вида диагностики являются:

• Высокая точность анализов с минимальной вероятностью ошибки;
• Высокая чувствительность к вирусным частицам в крови;
• Способность выявлять несколько инфекций одновременно;
• Диагностика патогенных внутри клеточных микроорганизмов с высоким антигенным разнообразием;
• Работа с анализами на гепатит позволяет находить скрытые инфекции.

Когда проводят ПЦР диагностику?

Вирус папилломы человека (ВПЧ) может передаваться как половым, так и бытовым путем. Частицы вируса микроразмерны и термостабильны, что исключает возможность абсолютно надежной защиты от инфекции. Известны случаи передачи ВПЧ новорожденным при родах, когда инфекция проявляется образованием папиллом в гортани. Появление патологических образований на половых органах (остроконечных бородавок) является первым признаком папилломавирусной инфекции. Специалисты в области гинекологии, урологии, венерологии и андрологии рекомендуют проводить ПЦР-диагностику для HPV 16, 18, 31, 51, 58 при наличии:

• Сниженного иммунного статуса;
• Изменений в клетках эпителиальной ткани половых органов;
• Первичном профилактическом скрининге рака шейки матки;
• Импотенции и бесплодия у мужчин;
• Снижении половой активности;
• Мониторинге эффективности радикального лечения.

Как выявляют вирус папилломы человека?

Для анализа на HPV 16, 18, 31, 51, 58 требуется забор биоматериала, который представляет собой кровь без фибриногена. Забор производится из локтевой вены в лаборатории между 8:00 и 10:30. Накануне анализа пациенту необходимо выполнить несколько рекомендаций:

1. Отказаться от противовирусных препаратов;
2. Избегать физической нагрузки и употребления алкоголя;
3. Ужинать до 20:00, избегая жирной и острой пищи;
4. Утром не курить, не пить кофе и не завтракать.

Методика полимеразной цепной реакции позволяет определить наличие в биоматериале искомый фрагмент ДНК возбудителя HPV 16, 18, 31, 51, 58 , его многократная амплификация (удвоение) исключает ложные результаты анализа. Читать подробнее о кабинете диагностики ВПЧ (HPV)

Что можно обнаружить методом ПЦР

Результаты анализа могут помочь выявить группу патологий.

Папилломатоз

Провоцируется особым одноименным вирусом. Вызывает образование на коже и внутренних органах хорошо знакомых многим наростов. В самом простом случае, речь идет о бородавках.

Однако также существуют и другие аномалии, например, невусы (родинки), остроконечные кондиломы. Последние образуются на репродуктивных органах и в области заднего прохода и передаются половым путем.

Множество штаммов вируса папилломы человека (известно более 150) имеют потенциальную онкогенность и могут вызывать рак. Поэтому ПЦР является незаменимым инструментом для раннего выявления и разработки индивидуальных профилактических и лечебных стратегии.

Герпес

Любого типа. Известно более 6-и штаммов этого вируса.

• Первый тип вызывает образование папул в области рта и губ;
• Второй тип передается половым путем и сложно поддается лечению;
• Третий — вирус варициллы-зостер, вызывающий ветряную оспу;
• Четвертый связан с мононуклеозом;
• Пятый — вирус цитомегалии;
• Шестой — инфекция, затрагивающая головной мозг.

Можно продолжать этот список. Главное здесь в том, что благодаря ПЦР мы можем выявить не только наличие герпеса, но и его штаммы, а также характер и степень поражения, что и является целью диагностики.

Гепатит

Воспаление печени. Полимеразная цепная реакция назначается не только для определения самого факта расстройства. Суть в другом.

ПЦР-диагностика инфекций позволяет разграничить септические и токсические формы гепатита, а также определить конкретный штамм вируса, разрушившего организм.

Кандидоз

Молочница. Она вызывается грибком с тем же названием и поражает слизистые оболочки, включая области рта и половые органы (как мужчин, так и женщин).

Вызывает массу осложнений и дискомфортных ощущений. ПЦР тест назначается в качестве верифицируемого, подтверждающего догадки метода, исследуется параллельно с данными анамнеза, визуальной оценки, симптоматики.

К другим инфекциям можно отнести хламидиоз, уреаплазмоз, микоплазмоз и другие венерические болезни.

СПИД

Вирус ВИЧ вызывает нарушения работы иммунитета. На ранних стадиях патологического процесса есть риск не заметить симптомы. Но именно этот момент — лучший для терапии. Поскольку дальше начинаются необратимые изменения в органах и системах.

Если болезнь не поддается контролю, обеспечить длительное здоровье пациента становится невозможным. ПЦР тестирование назначается для раннего выявления заболеваний.

Генетические аномалии

Эта методика применима для любых типов заболеваний. Поэтому она имеет большое значение для диагностики наследственных аномалий и остаётся перспективной, так как не все её аспекты еще освоены.

Как упоминалось ранее, ПЦР может быть использована для установления отцовства, для чего применяется специальная модификация анализа.

Подготовка к исследованию

Необходимые действия зависят от типа биоматериала, который будет взят.

Вот некоторые варианты:

Моча

Анализ мочи используется для диагностики мочеполовых инфекций и венерических заболеваний у мужчин и женщин. У мужчин данная методика не всегда применяется и часто заменяется забором материала из уретры.

На ночь перед проведением анализа запрещается проводить гигиенические процедуры в области половых органов. Анализ рекомендуется сдавать в течение суток после подозрительного полового акта, но это рекомендация, а не строгое правило.

Кровь

Также ее отдельные компоненты: сыворотка и пр. Забирают для определения гепатитов разных форм, дифференциальной диагностики патологий печени, выявления герпеса, СПИДа, также при обследовании на предмет генетических аномалий.

В этом случае не существует специальных требований к подготовке. Кровь сдается натощак, что является единственным требованием.

Мокрота

Отделяемое слизистой оболочки дыхательных путей. Исследуется для диагностики респираторных патологий, пневмонии, бронхита, определения источника процесса.

В рамках выявления других заболеваний, таких как легочные формы микоплазмоза и прочие, не требуется специальной подготовки.

Биоптат

Биологический материал, полученный со слизистой оболочки пищевода и желудка, используется для диагностики причин язвы, гастрита и прочих заболеваний этих органов.

Например, таким способом удается надежно обнаружить хеликобактер, который чаще всего и оказывается виновником патологических процессов. Подготовки опять же не нужно.

Соскобы со слизистых оболочек

В основном используется для диагностики венерических инфекций, коронавируса и не только.

Достаточно временно ограничить гигиену половых органов или полости рта, чтобы не смыть следы патогенной флоры, вирусов.

Другие биологические жидкости

Проби могут быть получены из ликвора, секрета предстательной железы и других материалов, в зависимости от показаний. Подготовка к анализу в этом случае будет специфической, и лучше уточнить детали у лечащего врача.

Главное требование к анализу ПЦР и его проведению – это забор биоматериала в стерильные условия.

Кроме того, образец не должен контактировать с окружающей средой и руками медицинского персонала. Как показывает практика, больше половины случаев неверного результата обусловлена именно нарушениями технологии получения биоматериала.

Поэтому для ПЦР-анализа используют одноразовые пробирки, контейнеры и вакуумные системы, которые гарантируют абсолютную стерильность во время тестирования.

В случае, если у врача есть подозрения на неточность анализа, диагностика проводится еще раз.

Полимеразная цепная реакция

Отрицательный результат

Существуют два основных сценария, когда это возможно: либо человек не инфицирован, либо был неправильно собран анализ.

Конечно, нельзя исключать, что концентрация возбудителей в исследуемой пробе может оказаться ниже, чем порог чувствительности аппарата.

Однако подобные случаи редки, и если у врача возникает сомнение, тест всегда можно повторить спустя некоторое время.

Если результаты диагностики ПЦР останутся отрицательными, то человек здоров.

Если результаты повторных анализов окажутся положительными, это свидетельствует о наличии инфекции у пациента, что требует немедленного начала лечения.

Расшифровка результатов ПЦР анализа должна проводиться врачом, который ведет лечение.

Расшифровывать результаты ПЦР анализа должен лечащий врач , которому известен ход лечения.

Наилучший вариант — когда этим занимается тот же врач, который осуществлял забор образцов для диагностики, имеет возможность следить за состоянием пациента и фиксировать любые изменения в его здоровье.

К сожалению, клиническое течение современных венерических заболеваний и инфекций сильно отличается от классического.

В таких ситуациях необходимо также проверять результаты ПЦР с помощью других диагностических методов:

• микроскопическое исследование мазка из половых органов или уретры
• серологические исследования крови на наличие антител к определенным инфекциям (например, ИФА, РПГА и ряд других)
• культуральный посев

К счастью, случаи, когда данные разных методов анализа contradict друг друга, возникают довольно редко. Например, когда ПЦР показывает положительный результат, а ИФА — тоже положительный.

Такое бывает в конце лечения пациента, когда патогенные микроорганизмы уже уничтожены и в организме человека их нет.

Тем не менее, антитела (иммуноглобулины) к возбудителям инфекции могут оставаться в крови на протяжении нескольких недель, месяцев или даже лет.

При клиническом выздоровлении, такое несоответствие трактуется в пользу ПЦР, так как его результаты более точные, чем исследования на основании антител.

Культуральный посев считается наиболее чувствительным и точным методом, но его результаты требуют ожидающей паузы — порой несколько дней или недель.

Именно поэтому бактериологическое исследование назначается лишь в тех случаях, когда ПЦР не может дать достоверного результата.

Крайне важно уметь соотносить полученные результаты анализов с клиническими проявлениями инфекции.

Так, в некоторых случаях результат ПЦР положителен, хотя возбудитель успешно элиминируется иммунной системой.

Если пациент недавно прошел курс лечения, в его организме могут оставаться мертвые патогенные микроорганизмы.

И хотя их геном может быть обнаружен, положительный результат анализов не всегда будет свидетельствовать о наличии заболевания.

Ложноотрицательный результат ПЦР анализа возможен:

• при недостаточно продуманном подходе к лечению пациента
• в случае забора материала из неподходящей биологической среды

Очень большое значение имеет тщательное выяснение всех деталей и нюансов заболевания.

Следует уделять особое внимание тому, какие препараты и методы использовал пациент с момента появления первых признаков болезни до обращения к врачу.

Например – антибиотики, которые можно купить в любой аптеке.

Самолечение зачастую приводит к значительному уменьшению количества микроорганизмов, что может вызвать ложный отрицательный результат ПЦР анализа.

Таким образом, задача врача в этом контексте сводится к правильному забору диагностического материала и интерпретации полученных данных.

Как проводится ПЦР-анализ

1. Метод с обратной транскрипцией. Наиболее распространенный способ определения известной последовательности РНК, включающий амплификацию, идентификацию патогена и его распознавание среди находящихся в научных коллекциях образцов.
2. Вложенная ПЦР (или «гнездовая») — применяется для снижения количества неспецифичных продуктов реакции, осуществляется в два этапа с использованием различных праймеров.
3. Изотермические методы — необходимы без повторяющихся температурных циклов, что делает их менее энергозатратными.
4. Инвертированная ПЦР — используется, если имеется лишь короткий сегмент известной последовательности, но требуется выяснить соседние последовательности после внедрения ДНК в геном.
5. ПЦР в реальном времени — метод, позволяющий не только установить наличие целевой нуклеотидной последовательности в образце, но и оценить количество её копий после каждого цикла амплификации, что позволяет проводить количественные тесты.

Результаты анализов, проведенных методом ПЦР, известны уже через один день. Иногда возможно проведение экстренного теста – его часто используют при оказании срочной медицинской помощи при госпитализации. Тогда срок готовности результата сокращается до считанных часов.

Результаты ПЦР-теста обеспечат точную информацию о диагностированной инфекции. При количественном анализе будет определена вирусная или бактериальная нагрузка на организм. В итоговых данных будет указан титр выявленного патогена (количество в одном миллилитре анализируемого образца). Количественный анализ особенно востребован при диагностике заболеваний, вызванных условно-патогенными микроорганизмами, которые обычно встречаются практически у каждого человека. Эти микроорганизмы могут представлять угрозу лишь в больших концентрациях, в противном случае они сосуществуют с носителем.

Разновидности ПЦР

ПЦР — перспективное направление исследований. Учёные постоянно совершенствуют способы проведения реакции и изобретают новые методики, адаптируя ПЦР под разные цели. В лабораторной диагностике применяются два основных метода — ПЦР в режиме реального времени и ПЦР с обратной транскрипцией.

Техника ПЦР в реальном времени (количественная) позволяет не только выявить патогенные ДНК, но и подсчитать количество их копий. Это важно для оценки степени инфекции, расчета дозировки медицинских препаратов и продолжительности их приема. ПЦР с обратной транскрипцией используется, если в качестве желаемого генетического материала служит не ДНК, а РНК вируса.

Проблема заключается в том, что у определенных патогенов, например вируса гепатита C, генетический материал представлен исключительно РНК — одноцепочечной последовательностью нуклеотидов, в отличие от двухцепочечной ДНК. Хотя она также несет генетическую информацию, стандартная ПЦР для неё не применяется. Для исследования РНК необходимо «восстановить» вторую цепь с помощью специального фермента — обратной транскриптазы. Таким образом, РНК переходит в ДНК, готовую к дальнейшему копированию с использованием стандартной или реальной ПЦР.

Что нужно для ПЦР

Для проведения полимеразной цепной реакции используется специальный прибор — амплификатор. Он поддерживает необходимую для каждого этапа температуру и проводит циклы копирования ДНК — амплификацию. Когда молекул становится достаточно для распознавания, оборудование анализирует их, а затем выдает качественный или количественный результат.

Пробирки с биоматериалом, подготовленным для ПЦР, в амплификаторе

• Целевая ДНК — это специфическая часть ДНК искомого патогена с уникальной последовательностью. Например, при ПЦР-анализе на герпес фокусируется на той части ДНК, которая отличает вирус герпеса от других. Также её называют ДНК-матрицей.

Нити ДНК и РНК состоят из маленьких единиц — нуклеотидов, которые в своей последовательности формируют генетический код, несящий наследственную информацию.

• Два праймера — это короткие из нуклеотидов нити, которые подходят к целевым нитям ДНК как детали в пазле. На основании праймеров в процессе ПЦР возникают новые молекулы ДНК. Если праймеры не идентифицировались, это говорит о том, что целевая ДНК отсутствует в биоматериале.
• ДНК-полимераза — это фермент, который осуществляет синтез новой цепи ДНК в процессе ПЦР.
• Дезоксинуклеотидтрифосфаты (дНТФ) — это смесь нуклеотидов, используемая для создания копий ДНК.
• Ионы магния (Mg2+) — способствуют активации ДНК-полимеразы.
• Буферный раствор — это смесь, создающая оптимальные условия для биохимических реакций.

Этапы полимеразной цепной реакции

Процесс ПЦР включает три ключевых этапа.

Сначала пробу нагревают, и все ДНК-молекулы, которые есть в биоматериале, распадаются на две нити РНК. Этот процесс называется денатурацией.

Если генетический материал патогена представлен РНК, а не ДНК, перед денатурацией проводится ПЦР с обратной транскрипцией, позволяющая преобразовать РНК в ДНК.

Затем температуру снижают. Если в пробе есть целевая ДНК, праймеры присоединяются к концам двух её нитей — так происходит отжиг.

После отжига фермент ДНК-полимераза начинает синтезировать вторую цепь ДНК, начиная от праймеров. Для завершения синтеза нити ДНК полимераза использует дНТФ. Заключительным этапом является элонгация.

В ходе ПЦР происходит более 30 циклов копирования (амплификации). В результате каждого цикла количество цепей ДНК удваивается. Так, в первом цикле их было 2, во втором станет 4, на третьем — 8, и так далее.

Какие инфекции позволяет выявить ПЦР

Каждый патоген — бактерия, вирус или гриб — содержит уникальные РНК- или ДНК-молекулы.

По наличию этих молекул в биоматериале можно быстро и точно определить заражение инфекционными микроорганизмами. Однако важно, чтобы ПЦР-исследование имело четкую цель — идентификация специфического патогена, наличие которого требуется подтвердить или опровергнуть. Обычно цель исследования определяется врачом на основе осмотра, проведенных диагностик и жалоб пациента.

Вирусные инфекции

У любых вирусов есть ДНК- или РНК-молекулы. ПЦР позволяет обнаружить их в организме, а ПЦР в реальном времени — ещё и подсчитать количество амплифицированных копий. Результат ПЦР может помочь врачу поставить диагноз, определить стадию болезни, подобрать дозировку лекарств и определить длительность курса лечения.