Когда начались исследования по гепатиту С в контексте переливания крови

Исследования по гепатиту С в контексте переливания крови начались в 1980-х годах, когда учёные обнаружили связь между инфекцией и трансфузиями. Примечательно, что до этого времени ключевые причины заболеваний печени после переливания крови оставались неясными.

В 1989 году был идентифицирован вирус гепатита С, что стало важным этапом в развитии тестов на выявление инфекции в донорской крови. Это позволило существенно снизить риск передачи заболевания через трансфузию, что в свою очередь улучшило безопасность переливаний.

Антитела к вирусу гепатита C

Гепатит С (HCV) представляет собой опасное вирусное заболевание, которое затрагивает печень. Установить диагноз на основании клинических проявлений затруднительно, так как симптомы могут совпадать с различными формами как вирусного, так и невирусного гепатита. Для выявления и идентификации возбудителя требуется анализ крови, который будет отправлен в лабораторию. В этом процессе применяются высокоспецифические тесты, включая определение антител к гепатиту С в сыворотке крови.

Главным виновником гепатита С является вирус, содержащий РНК. Инфекция передается через кровь. Существует несколько способов, посредством которых может возникнуть заражение гепатитом:

• во время переливания крови от зараженного донора;
• в процессе гемодиализа — процедуры очистки крови при недостаточной работе почек;
• при использовании инъекционных препаратов, включая наркотики;
• от матери к ребенку во время беременности.

Как правило, заболевание развивается в хронической форме и требует продолжительного лечения. После проникновения вируса в кровь пациент становится потенциальным источником инфекции и может передавать вирус другим. Прежде чем проявятся первые симптомы, должен пройти инкубационный период, в течение которого происходит увеличение числа вирусных частиц.

Затем вирус начинает атаковать печеночные клетки, что приводит к очевидным клиническим проявлениям заболевания. Начальные проявления включают общее недомогание, слабость, а позже — боли в правом боку. УЗИ показывает увеличение печени, а биохимический анализ крови сигнализирует о повышении активности печеночных ферментов. Окончательный диагноз можно установить только на основе специфических тестов, которые определяют тип вируса.

О чем говорит наличие антител к вирусу?

Когда вирус гепатита проникает в организм, иммунная система начинает с ним борьбу. Вирус содержит антигены — белки, которые распознаются иммунной системой. Такие антигены различаются между разными типами вирусов, что приводит к разнообразию механизма защиты. Иммунная система идентифицирует патоген и начинает вырабатывать антитела, известные как иммуноглобулины.

Антитела — это специфические белки, которые синтезируются клетками иммунной системы для борьбы с вирусами. В норме они отсутствуют в крови человека. Когда возбудитель проникает в организм, они активируются и уничтожают инфекцию. Определение этих иммуноглобулинов и лежит в основе диагностики вирусных заболеваний, в том числе гепатита С.

Существует шанс на получение ложноположительного результата на антитела к гепатиту. Диагноз ставится на основе совокупности нескольких анализов:

• биохимического анализа крови и УЗИ;
• иммуноферментного анализа (ИФА) — способа выявления антител;
• полимеразной цепной реакции (ПЦР) — для обнаружения РНК вируса, а не антител, вырабатываемых организмом.

Гепатит С — это заболевание, при котором происходит медленное разрушение печени.

Если анализы подтверждают наличие вируса, важно оценить его концентрацию и начать лечение. Бывает, что результаты тестов могут отличаться. К примеру, если антитела к гепатиту С положительные, а ПЦР отрицательный, это может означать, что вирус в крови присутствует в небольшом количестве. Такая ситуация может возникнуть после выздоровления, когда возбудитель был успешно устранен, но иммуноглобулины, выработанные в ответ на инфекцию, все еще находятся в крови.

Гепатит С

Гепатит С или посттрансфузионный гепатит — самая тяжелая форма вирусного поражения печени.

Гепатит С, также известный как посттрансфузионный гепатит, представляет собой самую тяжелую форму вирусного поражения печени. До 1989 года его называли «гепатитом ни А, ни В». Этот термин применяется, так как вирус чаще всего передается через переливание крови или нестерильные шприцы.

Главная особенность вируса гепатита С заключается в его генетической изменчивости, известно о существовании 6 главных генотипов вируса. Иммунная система не всегда успевает выработать необходимые антитела, поскольку у одного и того же пациента могут одновременно встречаться несколько генотипов. Гепатит С стал известен как «ласковый убийца» из-за большой распространенности среди всех вирусных гепатитов.

Это связано с большим количеством бессимптомных случаев заболевания. Чаще болеют молодые люди, но заболеть может каждый, тем более, что с каждым годом заболеваемость гепатитом С растет. Медики считают, что это связано с ростом наркомании. Хронический гепатит С лидирует среди причин состояний, требующих пересадки печени.

Вирус также проявляет высокую устойчивость в окружающей среде: при комнатной температуре он может сохраняться до 16 часов, а иногда и до 4 суток. Основной путь передачи инфекции — гематогенный и парентеральный (через кровь). Наиболее распространено заражение при инъекциях с использованием одной иглы или при совместном употреблении наркотиков.

Заразиться можно в тату-салонах, при процедуре маникюра. Высокий риск заражения в тюрьмах. Медперсонал может заразиться на рабочем месте — при травме во время работы с инфицированной кровью. Так как кровь, предназначеную для переливания, проверяют очень тщательно, веротность заражения очень мала.

Высокий риск заражения при медицинских процедурах сохраняется, особенно в развивающихся странах. В любом государстве существует вероятность заражения при нарушении санитарных норм. Половой путь передачи менее актуален, однако, возможен. Не более чем в 5% случаев инфекция может передаваться новорожденному от инфицированной матери во время родов. Часто бывает, что не удается установить точный источник заражения.

Диагностика После сбора анамнеза врач назначает лабораторную диагностику: анализ крови на антитела к вирусу гепатита С, биохимический анализ крови, ПЦР-диагностику, общий анализ крови, коагулограмму, УЗИ органов брюшной полости, пункционную биопсию печени. Симптомы гепатита С Инкубационный период составляет от 15 до 160 дней, а в среднем 50 дней.

У большинства людей гепатит С протекает без симптомов на протяжении многих лет. Иногда к моменту появления первых признаков поражение печени может быть уже значительным. Первые симптомы гепатита С схожи с другими вирусными гепатитами — это общее недомогание в безжелтушный период.

Это общая слабость, головная боль, повышение температуры, боль в суставах, мышечная боль, может быть тошнота, рвота, насморк и боль в горле. После чего наступает т.н. «желтушный» период. Моча «цвета темного пива», желтеют глазные склеры. Если поднять язык к верхнему небу, можно увидеть, что пожелтела слизистая рта. Начиная с ладоней, постепенно желтеют все кожные покровы.

Когда начинается желтушный период, общее недомогание уменьшается, а вот появляются тяжесть и боль в правом верхнем квадранте. Также может наблюдаться обесцвечивание кала, что связано с сужением желчных протоков. На сегодняшний день можно уверенно утверждать, что в 80-90% случаев гепатит С поддается полному излечению, если вовремя обратиться за медицинской помощью.

В случае неосложненного острого гепатита С выздоровление обычно наступает через 3-4 месяца с начала желтушного периода. Однако при присоединении других вирусных гепатитов состояние пациента может резко ухудшиться и привести к летальному исходу. Острый гепатит имеет возможность перейти в хроническую стадию.

Лечение гепатита С Сейчас для лечения гепатита С широко используется комбинированная противовирусная терапия. Наиболее часто назначают интерферон-альфа и рибавирин, либо по отдельности, либо вместе. Для правильного лечения гепатита С важны гепатопротекторы (эссенциале, фосфоглив, силимар), иммуномодуляторы (задаксин) и сопутствующая терапия.

Предотвращение гепатита С к сожалению, специфическая профилактика не разработана, вакцины отсутствуют. Если вы относитесь к группе риска и близко общаетесь с людьми, инфицированными или потенциально инфицированными, следует сделать прививку против гепатита В, так как есть возможность заразиться и этой инфекцией. Никогда не используйте одну зубную щетку, бритву или какие-либо предметы, на которых может быть кровь, например, маникюрные ножницы. При выполнении медицинских процедур убедитесь, что они проводятся в специализированных кабинетах с использованием одноразовых инструментов. То же касается и маникюра, и татуировок.

Когда стали проводить исследования на гепатит с при переливании крови

Перенесшим переливание крови до начала 1990-х годов следует сдать тест на гепатит С. Об этом Агентству городских новостей «Москва» сообщила руководитель Центра по лечению хронических вирусных гепатитов ИКБ №1 Елена Нурмухаметова.

«Скрининговые тесты на наличие антител к вирусу гепатита С появились в начале 1990-х годов, что произошло между 1993-1994 годами. Именно тогда началось тестирование донорской крови. В тех случаях, когда обнаруживались антитела, донорская кровь отбраковывалась, а сами доноры исключались из программы донорства. Это существенно улучшило ситуацию с инфицированием.

В настоящее время возможность заражения через донорскую кровь практически исключена. Однако тем людям, которые ранее — до начала 1990-х годов — получали переливания крови и не обследовались на гепатит С, в первую очередь стоит пройти тестирование для своего спокойствия», — советует специалист.

Елена Андреевна добавила, что вирус может годами и даже десятилетиями находиться в теле человека, не проявляя видимой активности.

«Заболевание может долгое время маскироваться под признаки усталости, общее недомогание или расстройства желудочно-кишечного тракта. Либо вообще не проявляться. К сожалению, у некоторых пациентов длительное бесконтрольное течение болезни может приводить к циррозу или даже раку печени. Поэтому важно внимательно следить за своим здоровьем и не игнорировать сигналы организма», — предостерегает специалист.

Также эксперт сказала, что провериться на гепатит С стоит людям, входящим в группу риска.

«В первую очередь, в группу риска входят медицинские работники, люди с регулярными беспорядочными половыми связями, пациенты, проходящие гемодиализ, а также те, кто употребляет наркотики, даже если это было единожды. Тестирование может проводиться по медицинским показаниям в случае появления подозрений по результатам простых обследований. Все это является прямым показанием для теста на антитела к гепатиту С», — уточняет Елена Нурмухаметова.

Биология и медицина

Обследование всех доноров на наличие HBsAg и запрет на платное донорство крови, введенные в начале 70-х годов, значительно снизили риск посттрансфузионного гепатита. В 70-е годы гепатит развивался у 10% пациентов, которым переливали донорскую кровь с проверкой на HBsAg (риск передачи инфекции при переливании одной дозы составляет 0,9%). От 5 до 10% случаев посттрансфузионного гепатита приходилось на гепатит В, остальные случаи, судя по отрицательным результатам серологических исследований, классифицировались как «гепатит, ни A, ни B». При переливании некоторых препаратов крови, например, препаратов факторов свёртывания, риск посттрансфузионного гепатита увеличивался до 20-30%; в случаях применения альбумина и иммуноглобулинов, подвергнутых обработке нагреванием до 60°C или фракционированием с использованием охлаждённого этанола, случаев вирусного гепатита В не зафиксировано.

В 80-х гг., когда лица из группы риска ВИЧ-инфекции добровольно отказались от донорства и было введено обследование доноров на антитела к ВИЧ , заболеваемость посттрансфузионным гепатитом снизилась до 5% и менее. В конце 80-х-начале 90-х гг., когда было установлено, что переливание крови доноров, у которых выявлены антитела к HBeAg или повышение активности АлАТ , сопряжено с высоким риском гепатита ни A ни B , и потом, когда был открыт вирус гепатита С и разработано первое поколение тестов для выявления антител к нему, заболеваемость снизилась еще больше. Так, проспективное исследование, проведенное в одной крупной клинике в 1986-1990 гг., показало, что после того, как у доноров стали определять активность АлАТ и антитела к HBeAg , заболеваемость посттрансфузионным гепатитом снизилась с 3,8% (риск заражения при переливании одной дозы крови или ее компонентов — 0,45%) до 1,5% (риск заражения — 0,19%), а после введения тестов на антитела к вирусу гепатита С первого поколения — до 0,6% (риск заражения — 0,03%). Серологические тесты второго поколения свели риск посттрансфузионного гепатита С практически к нулю.

Помимо реципиентов крови, в группу риска по гепатиту С Входят инъекционные наркоманы, хирурги, медицинские работники, работающие с кровью, и пациенты, находящиеся на гемодиализе. Несмотря на то, что контроль за донорами помог снизить случаи посттрансфузионного гепатита С, уровень заболеваемости оставался высоким до начала 90-х годов, после чего он начал снижаться благодаря уменьшению случаев заражений среди наркоманов. Сегодня, после того как донорскую плазму подвергают тестированию на антитела к вирусу, регистрации случаев гепатита С при использовании обычного иммуноглобулина для внутривенного введения становятся крайне редкими (иммуноглобулин для внутримышечного введения в этом плане является безопасным).

Антитела к вирусу гепатита С обнаруживают более чем у 90% больных посттрансфузионным гепатитом , гемофилией , более чем у 90% инъекционных наркоманов, у 60-70% больных гепатитом ни A ни В в отсутствие явных факторов риска и у 0,5% доноров; распространенность антител среди населения в целом — 1,5%. Большинство доноров с антителами к вирусу не входят в группу риска, и путь их заражения неизвестен. Возможно, заражение происходит половым путем или трансплацентарно, однако риск заражения подобным образом не превышает 5%, что недостаточно для появления такого большого числа необъяснимых случаев гепатита С. Очевидно, низкий риск заражения этими путями объясняется относительно небольшой концентрацией вируса: есть данные, что вероятность заражения выше при выраженной виремии или смешанной инфекции, вызванной вирусом гепатита С и ВИЧ . Кроме того, половой путь заражения имеет значение в основном для лиц, имеющих несколько половых партнеров. Риск заражения контактно-бытовым путем также невелик. Факторы риска не удается установить у 40% больных острым гепатитом С; обычно это представители низших слоев общества.

Вероятность заражения гепатитом С возрастает при наличии иммунодефицита, например, у пациентов с СПИДом или после проведения трансплантации органов. В таких случаях уровень антител к вирусу может быть крайне низким, и иногда диагноз устанавливается только с помощью анализа на вирусную РНК. Таким образом, хронический гепатит С может развиваться у 20% пациентов, перенесших пересадку почки. Высокий уровень смертности в первые годы после трансплантации у этих людей часто связан не с печеночной недостаточностью, а с иммуносупрессивным действием вируса гепатита С, что способствует возникновению серьезных внепеченочных инфекций. Спустя 5-10 лет после пересадки основное внимание замещается на осложнения, вызванные хроническим гепатитом С. Вопрос о том, как развивается гепатит С после трансплантации печени, остается обсуждаемым: в некоторых исследованиях указывается на серьезные повреждения печени, тогда как другие указывают на легкое течение заболевания.

Опыт использования метода ПЦР для выявления РНК (ДНК) возбудителей вирусных гепатитов В и С у серонегативных доноров

В настоящее время исследование образцов донорской крови на маркеры вирусных гепатитов В (ВГВ) и С (ВГС) проводят серологическими методами: иммуноферментным (ИФА) или иммунохемилюминисцентным (ИХЛА) анализом, позволяющими определять наличие в них поверхностного антигена ВГВ (HBsAg) и антител к белкам ВГС (анти HCV). Введение в лабораторную практику службы крови обязательного тестирования донорской крови на указанные серологические маркеры ВГВ и ВГС позволило значительно снизить риск посттрансфузионной передачи ВГС и ВГВ.

Известно, что специфические антитела к вирусу гепатита С начинают обнаруживаться примерно через 10-12 недель после инфицирования, хотя в некоторых случаях их выявление может затянуться до 30-50 недель [2,6]. Поэтому при применении методов ИФА или ИХЛА для анализа крови доноров, находящихся на ранней стадии ВГС, когда антитела еще не присутствуют (так называемое «серонегативное окно»), часто фиксируются ложноотрицательные результаты. В то же время в этот период наблюдается высокая виремия и значительная «инфекционная способность» крови [3]. Поэтому заготовленные от доноров в «серонегативном окне» компоненты крови становятся основным источником заражения реципиентов ВГС при переливании.

Использование NAT-технологий, в частности метода ПЦР, позволяет выявить РНК HCV в крови уже через 1-2 недели после заражения, т.е. приблизительно за 60 дней до выявления в ней антител к HCV серологическими тестами.

HBsAg в большинстве случаев является ключевым серологическим маркером острого и хронического ВГВ; его обнаружение в крови с высокой долей вероятности свидетельствует о наличии вируса. Однако были зафиксированы случаи заражения ВГВ при переливании крови, в которой HBsAg не обнаруживался. В настоящее время известно по меньшей мере о двух «ускользающих (escape)» мутантах HBsAg [9,13], которые могут возникать как естественно в ходе инфекции, так и вследствие противовирусной терапии.

Эти штаммы HBV способны передаваться горизонтально и могут вызывать ложноотрицательные результаты при скрининге донорской крови на HBsAg. Описана так называемая «молчащая» форма ВГВ, которая характеризуется наличием низких уровней вируса в крови при невыявляемом уровне HBsAg [2, 11]. Она может наблюдаться у некоторых пациентов после острого ВГВ, который разрешился самостоятельно, или даже после успешной противовирусной терапии, а также при хронической форме ВГВ. Установлено, что «молчащая» инфекция представляет клинический случай ВГВ, который может передаваться через кровяные компоненты; диагностика этой формы основывается на тщательном сборе анамнеза и использовании высокочувствительной ПЦР для выявления вирусной ДНК [1].

Задачей настоящей работы было оценить целесообразность использования метода ПЦР для скрининга донорской крови на маркеры ВГС ВГВ.

Кровь от каждого донора собирали в две пробирки: одну с разделительным гелем для получения сыворотки для серологических исследований и вторую с ЭДТА для получения плазмы для ПЦР.

Скрининг донорских сывороток на серологические маркеры ВИЧ 1,2, ВГВ и ВГС проводили методом ИФА на аппарате Evolis (компания Biorad, США) или методом ИХЛА на аппарате Architect (компания Abott, США).

Чтобы определить антитела к HCV, использовались тест-системы Murex anti HCV (Abbott, США) и Architect anti HCV (компания Abbott, США) при методах ИФА и ИХЛА соответственно.

Для выявления HBsAg применялись тест-системы Monolisa HBsAg Ultra (Bio-Rad, США) и Architect HBsAg (компания Abbott, США) с использованием метода ИФА.

Образцы, показавшие при первичном исследовании в ИФА или ИХЛА положительный результат на анти ВИЧ 1,2, анти HCV или HBsAg, отбирали для повторного исследования в тех же тест-системах и подтверждающих тестах.

Все серонегативные образцы анализировались с применением ПЦР для определения РНК HIV, HCV и ДНК HBV.

В течение 2008 года ПЦР-исследования проводили на аппаратах Cobas Ampliprep/ Cobas Amplicor ( компания Roch, Швейцария) с использованием тест-систем: Cobas Ampliprep/Cobas Amplicor HIV 1 Monitor Test , Cobas Ampliprep/ Cobas Amplicor HCV Test и Cobas Amplicor HBV Monitor Test.

С января 2009 года исследования проводились методом ПЦР в реальном времени с использованием инструментария Cobas 201 (Roche, Швейцария), который включает в себя пипетирующую рабочую станцию, аппарат для автоматического выделения нуклеиновых кислот Cobas Ampliprep и анализатор Cobas Taqman для автоматической амплификации и детекции нуклеиновых кислот с использованием технологии 5-нуклеазы.

Многоканальные оптические устройства данного прибора позволяют фиксировать флуоресцентный сигнал от исследуемого образца в каждом цикле ПЦР. Для анализа серонегативных образцов применялись мультиплексные тест-системы CobasTaqScreen MPX Test, разработанные компанией Roche специально для скрининга донорской крови [10].

За счет включения в реакционную смесь различных пар специфических праймеров и зондов эти системы позволяют выявлять одновременно в одной пробирке РНК HIV-1 rpyппы М и группы О, HIV-2, HCV и ДНК HBV. Образцы, при исследовании которых регистрировали нарастание флуоресцентного сигнала, считали положительными, т.е. содержащими вирусную РНК (ДНК). Такие образцы исследовали повторно в той же тест-системе. При получении повторно положительного результата проводили идентификацию выявленной нуклеиновой кислоты с помощью указанных выше ПЦР-диагностикумов на отдельные инфекции.

Результаты проведенного исследования представлены в таблицах 1 и 2.

Таблица 1 — Результаты исследования серонегативных образцов донорской крови методом ПЦР на комплексе Cobas Ampliprep/Cobas Amplicor

Общее количество образцов, в которых были выявлены:

Антитела к гепатиту С при ПЦР-исследовании

Такой подход к диагностике позволяет выяснить, активен ли вирус на текущий момент. Если результат негативный, это означает, что организм успешно справился с инфекцией – как независимо, так и в результате медицинских вмешательств. Положительный результат указывает на необходимость подбора противовирусных препаратов. Для оценки степени повреждения печени могут также проводиться УЗИ и другие диагностические процедуры, включая определение уровня билирубина в крови.

Даже при успешном лечении нет гарантии полной победы над заболеванием; возможны рецидивы, и сохраняется риск повторного заражения. Поэтому пациентам рекомендуется регулярно проходить тесты на ПЦР и посещать врача, чтобы вовремя заметить ухудшение состояния и начать лечение. Наблюдение у специалиста является одним из эффективных способов борьбы с вирусом.

Профилактика гепатита С

Понимая серьезные последствия, которые может вызвать гепатит С, многие интересуются, как предотвратить заражение. На данный момент эффективная вакцина не разработана. Для снижения риска инфицирования следует следовать простым рекомендациям:

• избегать употребления наркотиков, особенно их введения внутривенно;
• использовать барьерные методы контрацепции;
• проводить медицинские и косметологические процедуры только в учреждениях, соблюдающих санитарные нормы и имеющих необходимое оборудование для дезинфекции;
• регулярно проходить скрининговые тесты на гепатит С, чтобы вовремя начать лечение и уменьшить риск передачи инфекции другим людям.

Особенно это важно, если вы входите в какую-либо из групп риска по заболеванию. Это поможет сберечь здоровье вас и ваших близких и жить активной полноценной жизнью.